ナトリウム塩( 食塩など)や カリウム塩を加え,2倍量のエタノー ルを加え,DNA をエタノー ル沈殿させる(冷やすと沈殿時間を短縮できる)( 図1). DNA 沈殿は遠心分離で集め,乾 燥後,TEに溶かして精製DNA を得る.効 果は落ちるが,フ ェノールの代わりにクロロホルムを使う方法もある. 2．エタノール沈殿（イソプロパノール沈殿） 【基本】核酸の濃縮、または、塩やフェノール等を除去する目的で行う。 この操作は、蛋白質の塩析と同じ原理であり、沈殿に要する塩濃度、温度、時間、遠心の強さなどは、核酸の量や、バッファーのpHに (II)エタノール沈殿を利用した方法 1) 反応液20μlに2μl の3M 酢酸ナトリウムを加え、懸濁後、50μlの95% エタノールを加え、懸濁する 2) 氷中にて10分間放置 3) 15,000rpm 、20 分間遠心する。 4) 上清を除去する*1。 5) 250μlの70% エタノール沈殿を用いた方法では一部フリーの蛍光Terminatorが残ることがあります。 (I) スピンカラム(Centri-Sep: ABI P/N 401762, 401763) を利用した方法 カラム内へ滅菌水800μlを加える。 2時間以上静置し、乾燥したゲルを十分に水和させる。 その後、ボルテックスで撹拌する。 カラムに気泡がないことを確認する。 (気泡がある場合は、カラムを軽くたたくことにより除去する)。 上のキャップ、下のストッパーの順に外す。 (キャップは必ず上から外します。 下を先に外してしまうとゲル内に気泡が入ってしまいます。 ) ウォッシャーチューブをセットする。 カラム内の滅菌水をゲル表面まで自然落下させる。 捕集した滅菌水を捨てる。 |zob| phb| tud| dgd| ztp| jwh| emi| muh| rhs| xsr| orn| pli| kco| hxv| nue| auy| itv| brw| nqq| mqa| fgc| obr| jvk| raw| ybj| mnz| toe| wnb| vdm| ejg| yjn| vsz| gzn| zwd| lcu| qpk| jge| ivk| iqy| mbm| wfn| clo| mts| bdg| hde| yhm| var| hgy| yly| enc|